（1）患者在病房清潔、消毒手術部位后，換上經消毒的衣服、褲子并戴帽子至手術室。
（2）使用手術室對接車接送。無對接車者，在手術室入口處將患者換到手術室經清潔處理過的平車上。車輪通過粘附墊吸塵處理后推入手術間。
（3）皮膚消毒:為使手術部位的皮膚達到較寬的殺菌范圍，應采用兩種或兩種以上的混合消毒液消毒。
（4）鋪無菌草:無菌單應采用不利于細菌生存的非織物材料。鋪無菌單時應根據手術室空氣流動方向采用不同方式:垂直層流手術間鋪置的無菌單應垂直地板，如不垂于地板，就會引起空氣紊流，使污染物質從地板掀起;水平層流間手術鋪置地無菌單，垂在手術臺前后端的部分不應超過手術臺至地面距離的1/3。如果垂至地板，就會引起空氣紊流，使污染物質從地板飛揚起來。而在手術臺兩側的無菌單是可以垂至地板的。
（5）限制在手術臺上翻動。如確實有必要翻動蓋單時，應盡可能輕柔，以免帶菌飄浮物沉降于無菌手術區內。
6.1 運行系統的管理
制定出系統的管理規程并嚴格執行，整體調控系統、運行系統和監測系統必須設專人管理。
6.2 維護性管理
整個潔凈設備系統需設專門維修人員進行精心維護和修理，制定出有效可行的措施。（1）通風罩應每周清潔處理1次。（2）通風機的狀況應每周檢測。（3）過濾設備定期檢查、維修和保養，以保證過濾設備的正常運轉與良好性能。初、中效過濾器每隔30天檢測一次，并用洗滌劑清洗，備用一套，以備清洗時使用。根據使用情況，初、中效過濾器應該每隔3～6個月更換一次，在更換前過濾器應是干的。在未裝初、中效過濾器前設備不能運行，這樣才能延長價格較貴的過濾器的使用壽命。同時，潔凈室周圍環境的清潔、空調送風過濾系統的正常運行和嚴格的使用管理規范，也是延長空氣過濾器使用壽命的關鍵。（4）風淋室運行2年后，應檢查進出門的密封性。
6.3 機房的管理
專人管理，控制凈化空調設備的運行和停止。清掃并保持機房衛生。對凈化手術室運行情況進行記錄。
1、層流凈化手術室送風氣流的流型
層流凈化手術室送風氣流的流型在國內外主要有垂直單向流、水平單向流和非單向流等。
在我國2002年“醫院潔凈手術部建筑技術規范”中規定：Ⅰ級潔凈手術室的100級潔凈區域（手術區）的氣流必須是單向流（垂直單向流），而且過濾器的滿布率應75%-85%；對于Ⅱ級、Ⅲ級和Ⅳ級潔凈手術室的手術區是低于100級的潔凈區，其氣流流型為非單向流，但送風口宜設在手術區的上方，過濾器宜集中布臵在手術區上方的送風口處，要求潔凈的氣流覆蓋手術區，使手術區獲得的凈化效果。
實驗證明：在各種不同的送風速度情況下，垂直單向流比水平單向流手術室的細菌濃度低。
2、層流凈化手術室的風量、溫度和濕度
根據2002年我國“醫院潔凈手術部建筑技術規范”規定：Ⅰ級潔凈手術室的單向流斷面風速為0.2-0.3m/s；Ⅱ級潔凈手術室的換氣次數為30-36次/h；Ⅲ級潔凈手術室的換氣次數為18-22次/h；Ⅳ級潔凈手術室的換氣次數為12-15次/h。
我國規定手術室內溫度（℃）在22-25之間，手術室內相對濕度（%）在40-60之間
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